合适的电场强度对于电转染实验非常重要,
电场强度过高会导致细胞死亡率过高,电场强度也不能过低,过低导致细胞膜的通透性不够好或在膜上形成小孔,不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。
2、细胞选择不正确
用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞(15代以内,传代后2d)。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛,表面结构致密比稳定期的细胞差,电转后,细胞膜的恢复能力强,而且处于有丝分裂期的细胞更容易接受外源DNA.
3、质粒质量不佳
应选择纯度高的质粒,首先DNA/RNA应该超纯(A260/A280>1.8),其次应不含内毒素,同时质粒应溶于双蒸水而不是TE缓冲溶液。另外,DNA浓度不宜过高。
4、电转染试剂不合适
电击会对细胞造成一定程度的伤害,在转染试剂的选择上要注意,具有细胞膜修复成分的电转染试剂当然是非常好的选择。