来自大连工业大学的朱雅慧、朱洪日和王佳莹等人以Lm标准菌株ATCC 19115为主要研究对象，将其接种于三文鱼基质上，于0、4、7 ℃贮藏条件下分别培养24 h和48 h，以Lm主要毒力因子inlB、hlyA、prfA、sigB为研究对象，利用反转录实时定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）的方法对inlB、hlyA、prfA、sigB的表达进行研究，有助于更好地了解食品基质和贮藏温度对于Lm毒力基因表达的影响，从而为进一步探究Lm 致病机理和高效防控Lm 提供相关的理论依据。
1. 引物及主要毒力基因的验证
PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳后，hlyA、inlB、prfA和sigB均在预期大小的位置得到相应的条带，由此可知Lm ATCC 19115含有这4 种主要的毒力因子。
2. RNA的提取及纯化
将三文鱼基质上和平板上的Lm 冲洗下来提取的RNA，经1%琼脂凝胶电泳进行检测，提取的总RNA、23S和16S rRNA条带较清晰，但有明显的拖尾现象，表明有DNA等杂质的污染。将上述样本用DNA酶纯化后，经1%琼脂凝胶电泳进行检测，结果见图2B在RNA完整性保存良好的同时几乎不存在DNA污染，且OD260 nm/OD280 nm为1.8～2.1，RNA纯化处理成功，可以进行后续实验。
3. 三文鱼基质上毒力因子的表达水平分析
Lm ATCC 19115在鱼肉基质上，0、4、7 ℃培养24 h和48 h，inlB、hlyA、prfA、sigB的相对表达量均上调。其中hlyA在贮藏48 h的三文鱼基质上的表达上调最为显着，由此可知，与平板相比，鱼肉基质能够一定程度地增加毒力因子inlB、hlyA、prfA、sigB的表达量。
结论
在0、4 ℃和7 ℃分别培养24 h和48 h后，4 个主要毒力因子在三文鱼基质上的表达量均高于平板对照，其中hlyA在贮藏4 ℃的三文鱼基质上表达上调的最为显着。此外，prfA和sigB在4 ℃贮藏条件下，表达量极显着高于7 ℃和0 ℃（P＜0.01）；在不同的温度贮藏24 h，inlB和hlyA的表达量均表现为7 ℃＞4 ℃＞0 ℃（P＜0.01）；且4 个主要毒力因子在三文鱼基质上的相对表达量均表现为48 h＞24 h（P＜0.01）。综上所述，本研究为该菌在食品基质上的风险评估和有效防控提供一定的理论依据。
