因此，来自浙江工商大学食品与生物工程学院的傅玲琳、谢梦华、王翀等人以甲壳类水产品主要过敏原TM为研究对象，对比口服灌胃与腹腔注射两种给药方式对BALB/c小鼠的致敏效果，寻求TM致敏动物模型的最佳给药途径，以便建立有效的TM致敏动物模型，并初步探究两种给药方式产生不同致敏效果的分子及免疫学机理，既为其他食物过敏原的动物模型构建提供一定的理论依据，也便为后期研究食物过敏预防及治疗提供一定的模型及理论依据。
1. TM的SDS-PAGE分析结果
在不同批次的南美白对虾肉通过硫酸铵沉淀、PBS复溶后的SDS-PAGE分析中，其中灰度最深的条带在36.1 kDa，与理论计算值相同，因此可以确定所提蛋白为TM，利用AlphaView SA 3.4.0电泳图像分析软件分析可知，TM纯度大于95%，其他分子质量位置虽有少量杂蛋白，但含量极低，不影响后续实验进行。
2. 食物过敏评价指标的结果分析
2.1 食物过敏症状评分结果
腹腔注射模型组中，IP-L组只有少数小鼠产生轻微的过敏症状，而随着过敏原剂量的增加，小鼠的过敏症状逐渐增强。IP-H组中小鼠的过敏症状评分已出现4 分及5 分，即肌肉抽搐和死亡，表明腹腔注射过敏原剂量已接近小鼠最大耐受量，致敏效果显着。
2.2 不同致敏方式导致小鼠血清中TM特异性抗体IgE含量变化分析
口服灌胃模型组TM-sIgE的OD490 nm变化范围大多都在0.2以内，差别很小，只有IG-M组在第一次激发后IgE含量急剧上升，OD490 nm达到0.5左右。但所有组别基本变化趋势相同，在第一激发时，IgE含量均有所上升，但在第二次激发后，IgE含量均下降。在第二次激发后，与CT组相比，仅IG-M组差异显着，其他两组均无显着性差异。
腹腔注射模型组小鼠在致敏结束后的IgE含量就已明显高于口服灌胃模型组，且在激发后IgE含量逐渐上升。IP-H组在第二次激发时IgE的OD490 nm超过0.6，IP-L和IP-M组的OD490 nm也超过0.3，且与F组相比，IP-L、IP-M、IP-H 3 个剂量组均有显着性差异，尤其是IP-H致敏效果最显着。
2.3 不同致敏方式导致小鼠血清TM特异性抗体IgG2a含量变化分析
腹腔注射模型组中，TM-sIgG2a含量虽有轻微上升趋势，且第二次激发时IP-H组与F组相比有显着性差异，但口服灌胃模型组中IgG2a变化更为显着，第二次激发后，口服灌胃IG-M组sIgG2a的OD490 nm高达1.8，而腹腔注射的IP-H组的OD490 nm只达到0.22。因此，口服灌胃模型组中sIgE含量较少，可能是因为机体自身免疫调节使免疫应答趋向于Th1型，从而产生大量IgG2a，降低了致敏效果。
2.4 血清中组胺质量浓度变化分析
在第二次激发后，口服灌胃模型组中IG-L组和IG-H组小鼠血清中组胺质量浓度与CT组相比均无显着性差异，仅IG-M组差异显着；而腹腔注射模型组中IP-L、IP-M、IP-H组与F组相比均有显着性差异，特别是IP-H组，组胺质量浓度达到37 ng/mL，接近F组的2 倍。
2.5 小鼠脾脏细胞上清液中细胞因子IL-4、IL-5、IL-13、IL-10、IFN-γ的质量浓度分析。
与CT组相比，IG-M组的IL-5、IL-13质量浓度有所增加，IL-4质量浓度无显着性差异；而IP-H组与F组相比IL-4、IL-5、IL-13质量浓度均显着升高；IG-M组IFN-γ质量浓度显着升高，IL-10质量浓度无显着性差异，但与腹腔注射模型组相比质量浓度显着上升。IG-M组的IL-5、IL-10及IFN-γ质量浓度均高于IP-H组，而IL-4、IL-13则低于IP-H组。
2.6 小鼠结肠中Th17相关转录因子IL-17A、IL-23mRNA相对表达量分析
分别与佐剂组相比： IG-M 组的IL-17A mRNA相对表达量未有显着变化，而IP-H组则显着增加，且IG-M组与IP-H组相比也有显着性差异；IG-M组与IP-H组的IL-23 mRNA相对表达量均显着增加，且IG-M组与IP-H组相比无显着性差异，可能是由于IL-23是Th17存活、增殖、功能维持的主要因子，并不能促进Th17分化，因此在Th17达到一定量后即维持在此含量，但IL-17A是Th17的效应因子，其含量的多少决定下游过敏效应的强弱。综上，IP-H组的Th17的转录因子相对表达量高于IG-M组，其致敏效果更好，这也与上述sIgE、Th2型细胞因子的测定结果相对应。
2.7 小鼠脾脏中Treg细胞比例分析
与对照组相比，IG-M组的Treg细胞比例显着上升，而IP-H组虽有增加，却无显着性，且IG-M组与IP-H组相比也有显着性上升。Treg细胞与Th17之间有密切关系，两者分化均需要TGF-β，但高浓度的TGF-β会抑制Th17细胞分化，且促进Treg细胞分化的IL-2会抑制Th17细胞分化。
结 论
腹腔注射小鼠血清中特异性免疫球蛋白（Ig）E、组胺以及辅助性T细胞（Th）2型细胞因子含量均高于口服灌胃小鼠，其致敏性更好。此外，口服灌胃小鼠血清特异性IgG2a、干扰素-γ、调节性T细胞水平增加，表明虽有黏膜佐剂作用，但口服给药仍可能使小鼠产生口服免疫耐受，从而降低对虾原肌球蛋白对其的致敏性。本研究表明，腹腔注射原肌球蛋白比口服灌胃更易使小鼠致敏，其Th1/Th2平衡被打破，Th2反应占据优势，更适合用于构建食物致敏动物模型。
