牛乳铁蛋白（LFB）分子质量与LFH分子质量相近，且牛乳铁蛋白素（LfcinB）与人乳铁蛋白素（LfcinH）的顺序同源性高达69%，LFB原料来源便捷、价廉，尤其是小肽LfcinB的生产更节约成本。如何以低价等效成分替代母乳活性成分，对于降低婴儿配方奶粉中免疫活性物质的成本具有重要的意义。因此，来自东北农业大学食品学院的皮冰冰、赵 晓、彭钰凯等人以牛乳清乳铁蛋白（LFW）、牛初乳乳铁蛋白（LFC）与LFH及LfcinB与LfcinH为原料，探究其作用的最佳剂量及相互替代的用量比例关系，为LFB替代LFH在配方奶粉中的添加提供科学理论依据。
1. LF及Lfcin对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
1.1 LF对小鼠脾淋巴细胞相对存活率的影响
在24 h时，4.00 mg/mL LFW及4.00 mg/mLLFH与阴性对照组相比显着性差异（P＜0.05）。由细胞相对存活率可知，LFW对淋巴细胞的增殖效果相对高于其他两种LF，其他两种LF对细胞增殖既有促进作用也有抑制作用，但促进效果低于LFW的促进效果。
在48 h时，1.00、2.00 mg/mL的LFC及1.00、2.00、4.00 mg/mL的LFH与阴性对照组相比有显着性差异（P＜0.05）。由细胞相对存活率可知，LF在48 h时作用效果随质量浓度增大呈先增强后下降的趋势，LFW的作用效果随时间及质量浓度的变化波动较小。
在72 h时，0.50、1.00、4.00 mg/mL LFC及1.00、2.00、4.00 mg/mL LFH与阴性对照组相比有显着性差异（P＜0.05）。由细胞相对存活率可知，LF在72 h时3 种LF对细胞的增殖作用效果无明显规律。
在不同时间内不同来源的LF对淋巴细胞的作用程度不同，3 种LF在48 h的细胞相对存活率较高。LF在48 h时作用效果随质量浓度增大整体呈先增强后下降的趋势，LFW的作用效果随时间及质量浓度的变化波动较小。LFH在1.00 mg/mL时对淋巴细胞增殖的促进作用效果最高，而LFC在2.00 mg/mL时效果与其最为接近。结果表明，LFH的最佳质量浓度为1.00 mg/mL，与细胞的添加比例为1∶5，LFC对细胞的增殖作用可替代LFH的作用效果，替代质量浓度约为LFH的2 倍。
1.2 Lfcin对小鼠脾淋巴细胞相对存活率的影响
在24 h时，LfcinB及LfcinH与阴性对照组相比显着性不差异（P＜0.05），但均在100 μg/mL时细胞相对存活率达到最大。在48 h时，75～150 μg/mLLfcinB及100 μg/mL LfcinH与阴性对照组相比有显着性差异（P＜0.05）。LfcinH的最佳效果高于LfcinB的最佳效果。在72 h时，100 μg/mL LfcinH与对照组相比有显着性差异（P＜0.05）。由细胞存活率可知，LfcinH的效果整体优于LfcinB的作用效果。
48 h的相对存活率显示，LfcinB对淋巴细胞的促进作用在125 μg/mL时达到最大，而LfcinH在100 μg/mL时达到最大，且效果优于LfcinB的最大效果。结果表明，LfcinH的最佳添加质量浓度为100 μg/mL，与细胞的添加比例为1：5，LfcinB对细胞的增殖作用可替代LfcinH的作用效果，替代效果略差。
Lfcin与LF都在最大促进作用效果时LFH的添加用量约为LfcinH的10 倍，而LFB的添加量约为LfcinB的16 倍，来源于牛乳与人乳的LF及Lfcin均可增强免疫淋巴细胞的存活率，且来源于人的LF及Lfcin对淋巴细胞存活的促进效果高于来源于牛的LF及Lfcin，其中来源于牛乳的LFC作用效果大于LFW，并且使用Lfcin可大大降低使用剂量。
2. LF与Lfcin在ConA刺激下对T脾淋巴细胞增殖的影响
LF与在ConA的刺激下培养细胞48 h后，淋巴细胞的相对存活率均先升高后下降。LFW在0.10～4.00 mg/mL范围内对ConA刺激的淋巴细胞的增殖能力均为促进作用，在0.50 mg/mL达到最大效果，但整体效果差异较小。LFC与LFH在0.10 mg/mL时抑制ConA刺激的淋巴细胞增殖，在0.25～4.00 mg/mL范围内促进ConA刺激的淋巴细胞增殖，LFC在1.00 mg/mL时达到最大效果，LFH在0.50 mg/mL时达到最大效果，LFC高于其他两种LF的最佳效果。结果表明，两种LFB可在最大效果0.50 mg/mL处替代LFH的作用，且增加LFC的剂量可以达到更佳的效果。
Lfcin在与ConA的刺激下培养细胞48 h后，小鼠的免疫淋巴细胞的相对存活率均随着Lfcin质量浓度的增加而先升高后下降。LfcinB在75 μg/mL时作用效果达到最高，此质量浓度LfcinH的作用效果与LfcinB的作用效果基本持平，而LfcinH在100 μg/mL时作用效果达到最高。结果表明，在与ConA共同按1∶1作用淋巴细胞时，LfcinB与LfcinH的最佳添加质量浓度分别为75、100 μg/mL，按1∶5作用细胞悬液，但加大剂量会加强LfcinH的作用效果，LfcinB对细胞的增殖作用可替代LfcinH的作用效果，替代效果略差。
Lfcin与LF都在最大促进作用效果时LFH的添加用量约为LfcinH的5 倍，而LFB的添加量约为LfcinB的13 倍。LFH与ConA共同作用的最佳使用质量浓度为0.50 mg/mL，此作用效果可用同质量浓度的LFW与LFC替代，且将LFC的剂量提高一倍所得效果远远高于LFH的作用效果。由此表明，来源于牛乳的LF及Lfcin可替代来源于人乳的LF及Lfcin对免疫淋巴细胞存活率的影响作用，并且使用Lfcin可大大降低使用剂量。
3. LF与Lfcin在LPS刺激下对B脾淋巴细胞增殖的影响
LF与LPS对免疫淋巴细胞协同刺激作用后，增强效果随质量浓度的提高先升高后降低，LFH在0.50～4.00 mg/mL范围内效果波动不明显，并在2.00 mg/mL时达到最大效果。LFW与LFC分别在0.50 mg/mL与2.00 mg/mL时可近似达到LFH的最大效果。结果表明，在与等量的LPS共同作用下，LFH的最佳添加质量浓度为2.00 mg/mL，与细胞的添加比例为1∶5，LFW与LFC质量浓度分别为0.50 mg/mL与2.00 mg/mL时对细胞的增殖作用可替代LFH的作用效果，替代效果略差。
在分别与LPS按1∶1比例的共同作用下，50～100 μg/mL LfcinB与LfcinH对淋巴细胞均具有促进增殖的作用，且均呈先升高后下降的趋势。且LfcinH与LfcinB均在100 μg/mL时对淋巴细胞的增殖促进效果最佳。结果表明，LfcinB可替代LfcinH对免疫淋巴细胞增殖的促进作用，但替代效果略差。
在丝裂原LPS的作用下，Lfcin与LF都在最大促进作用效果时LFH的添加用量约为LfcinH的20 倍，而LFW的添加量约为LfcinB的5 倍，LFC的添加量约为LfcinB的20 倍，且来源于人乳的LF及Lfcin对淋巴细胞存活的促进效果略高于来源于牛乳的LF及Lfcin，由此表明来源于牛乳的LF及Lfcin可替代来源于人乳的LF及Lfcin对免疫淋巴细胞存活率的影响作用，并且使用Lfcin可大大降低使用剂量。
结 论
LF与Lfcin均在48 h时对小鼠脾淋巴细胞增殖的促进效果最好，且在一定质量浓度范围内促进效果随质量浓度升高而加强；LF与Lfcin均在一定质量浓度范围内提高刀豆蛋白A诱导的T淋巴细胞的增殖和脂多糖诱导的B淋巴细胞的增殖。结果表明：两种牛乳铁蛋白（bovine lactoferrin，LFB）及LfcinB可替代LFH应用于婴幼儿配方产品中以提高婴幼儿免疫能力，LFB推荐添加质量浓度为0.50～2.00 mg/mL，Lfcin推荐添加质量浓度为75～125 μg/mL。
