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1 株牦牛源产细菌素植物乳杆菌的益生特性分析

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-09-11
核心提示:牦牛是青藏高原山脉附近的特有畜种,是牧民赖以生存的生产与生活资料。由于牦牛制品如牦牛肉干、牦牛肉酱、牦牛酸奶和奶酪等天然、绿色、风味独特的特点,受到了广大消费者的喜爱。但牦牛制品中的食源性致病微生物问题却不容忽视。
   牦牛是青藏高原山脉附近的特有畜种,是牧民赖以生存的生产与生活资料。由于牦牛制品如牦牛肉干、牦牛肉酱、牦牛酸奶和奶酪等天然、绿色、风味独特的特点,受到了广大消费者的喜爱。但牦牛制品中的食源性致病微生物问题却不容忽视。
 
  乳酸菌普遍存在人与动物体内,是国际公认食品级安全微生物。乳酸菌不仅可以改善胃肠道微生态环境,还可以刺激黏膜和全身免疫,发挥免疫调节功能,促进动物生长发育,提高肠黏膜免疫等。西南民族大学生命科学与技术学院周晏阳、孔雪英、吴 梅等人通过评价牦牛源产细菌素植物乳杆菌SWUN5815的益生性能,以期为牦牛源益生菌的开发提供新的菌种资源,为进一步开发牦牛专用的微生态制剂以及食品添加剂提供理论支持。
 
  1、 SWUN5815株的菌落形态及细胞形态特征
 
  SWUN5815在MRS固体培养基上菌落形态呈圆形,颜色呈乳白色,表面光滑湿润,显微镜下呈短杆状,无芽孢,革兰氏染色呈阳性。
 
  2、 SWUN5815 16S rRNA序列PCR扩增结果及系统进化树构建
 
  按照PCR条件进行扩增,琼脂糖电泳检测结果显示SWUN5815 16S rRNA基因扩增片段大小约为1 500 bp,与预期片段大小相符。根据16S rRNA序列测序结果,将其与GenBank中不同来源的植物乳杆菌相同区段基因序列构建系统进化树。结果可知,11 株植物乳杆菌分为两大支,SWUN5815与绵羊和山羊源的植物乳杆菌的遗传进化关系较近。
 
  3、 SWUN5815的生长曲线
 
  结果可知,SWUN5815菌株在0~2 h处于适应期,2~12 h为对数期,大约到12 h达到生长高峰,12~24 h为稳定期,从该曲线上可以确定该菌体的最佳收获时间是11 h。
 
  4、 SWUN5815对牦牛源病原菌的抑制结果
 
  SWUN5815所产细菌素对牦牛源肠道菌具有广谱抑菌活性。
 
  5、 SWUN5815抗生素敏感实验结果
 
  本实验中质控菌株大肠杆菌(ATCC25922)和金葡球菌(ATCC25923)的抗药性证明了结果的可靠性。根据美国临床标准委员会(NCCLS)推荐的K-B纸片扩散法检测乳酸菌对多种药物的敏感性。牦牛源植物乳杆菌SWUN5815对常用的9 种常用抗生素敏感。
 
  6、 SWUN5815耐酸和耐胆盐能力
 
  SWUN5815对pH 2.0和pH 3.0的不同生长环境表现出了不同程度的耐受性。在pH 2.0的环境下存活率为58.2%,在pH 3.0的环境下的存活率达到86.9%。SWUN5815在0.3%的牛胆酸盐存在条件下培养3 h后,其对0.3%胆盐的耐受率约为66.8%,说明其对胆盐的耐受性较好。
 
  7、 SWUN5815对Caco-2细胞的黏附效果
 
  将标记好的SWUN5815与Caco-2细胞孵育结束后,计算得到SWUN5815对Caco-2细胞的黏附率为42%。
 
  8、 SWUN5815对小鼠体质量的影响
 
  在灌胃7、14、21 d后5×108 CFU组平均质量增加值均高于对照组。在灌胃7 d后5×108 CFU组的平均体质量已经显着高于对照组(P<0.05),灌胃21 d,5×108 CFU组小鼠的体质量与对照组相比差异极显着(P<0.01)。
 
  9、 SWUN5815对小鼠小肠黏膜SIgA的影响
 
  5×108 CFU组的植物乳杆菌SWUN5815能够极显着提高SIgA的分泌(P<0.01)。
 
  讨 论
 
  本实验研究结果表明SWUN5815在灌胃7 d就可以显着提高小鼠的肠黏膜免疫,前面实验证明了SWUN5815具有良好的黏附性能,而乳酸菌的黏附性是决定其免疫调节活性的关键因素。SWUN5815进入到肠道后,可以黏附到肠上皮细胞,其菌体本身和代谢产物能够刺激肠黏膜免疫系统,促进SIgA的分泌。黏附性强的乳酸菌能延长与宿主细胞的相互作用时间,从而更好地增强机体的免疫应答。也有可能是SWUN5815通过合成分泌细菌素、抗氧化活性酶和降胆固醇相关酶来提升动物的抗病能力。
 
  SWUN5815分离于牦牛肠道,具有种属特异性,所以更适应青藏高原的生态环境。并且其分泌的细菌素对牦牛体内常见的病原菌均有良好的抑制作用,在牦牛奶制品和肉制品加工和贮藏过程中可以有效阻止微生物的污染,所以无论作为食品添加剂或者微生态制剂SWUN5815都是十分有潜力的优良益生菌株。
 
 
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